人类血小板抗原全套基因分型方法的建立与应用＝Establishment and application of human platelet antigen genotyping with PCR sequencing-based typing method［刊，中］／许先国，朱发明，刘瑛，洪小珍，马开荣，蓝小飞，严力行(浙江省血液中心输血研究所  卫生部血液安全研究重点实验室，杭州310006）//中华检验医学杂志.－2009，32(4).－407～411

     目的  建立一种基于DNA扩增和测序分型（PCR sequencing-based typing，PCR-SBT）的人类血小板抗原HPA-1～HPA-16w的基因分型方法。方法  从免疫多态性数据库中下载HPA-1～HPA-16w的全套HPA核酸序列，以Primer Premier 5.0软件设计引物，特异性扩增包含HPA-1a/1b到HPA-16aw/16bw多态性的核酸片段。通过调整引物序列和PCR条件获得单一的特异性扩增产物，PCR产物纯化后直接进行DNA序列分析并确定HPA基因型。通过对2份标准样本的HPA分型验证PCR-SBT方法的准确性；并利用PCR-SBT法对2008年度国际输血协会（ISBT）第14届国际血小板免疫学工作组提供的16份比对样本（包括6个含有基因突变的干扰样本）进行HPA基因分型。结果设计11对引物扩增和测序16个HPA系统。2份标准样本的HPA基因型分别为HPA：1aa/2aa/3ab/4aa/5ab/6aa/7aa/8aa/9aa/10aa/11aa/12aa/13aa/14aa/15aa/16aa和HPA：1aa/2aa/3aa/4aa/5aa/6aa/7aa/8aa/9aa/10aa/11aa/12aa/13aa/14aa/15aa/16aa。16份ISBT考核样本的256个HPA基因型结果清晰，其中HPA-1~HPA-6w、HPA-9w和HPA-15共8个系统的128个基因型结果与ISBT参考结果完全一致。结论  建立了HPA-1～HPA-16w的PCR-SBT分型方法，结合高通量的DNA序列分析仪，具有简单、快速和准确的优点，适合于临床HPA全套基因分型，具有良好的应用前景。

图2 表2 参9（武昱）关键词：抗原, 人血小板；基因型；聚合酶链反应

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