论著
宫颈癌前病变患者阴道微生物群落的构成研究
中华检验医学杂志, 2017,40(07) : 505-510. DOI: 10.3760/cma.j.issn.1009-9158.2017.07.007
摘要
目的

探讨妇女阴道微生物群落构成与宫颈癌前病变的关系。

方法

采集2014年7月至2015年7月于中南大学湘雅二医院就诊的22名健康女性(对照)及宫颈上皮内瘤变Ⅰ级(CINⅠ)患者18例和宫颈上皮内瘤变Ⅱ/Ⅲ级(CINⅡ/Ⅲ)患者24例的阴道分泌物,分别对每份标本进行细菌基因组DNA提取、16S rRNA V3、V4区基因扩增及采用高通量测序技术对扩增的PCR产物进行测序等步骤,再采用Uparse软件、Mothur分析流程和LefSe统计软件,分析阴道微生物群落物种丰度和结构,并对各组女性的阴道微生物群落构成进行比较。

结果

CINⅡ/Ⅲ组标本的Alpha多样性指标(Chao:63±32;ACE:72±38;辛普森指数:0.70±0.27;香农指数:0.70±0.63)与对照组(Chao:48±24;ACE:54±25;辛普森指数:0.71±0.27;香农指数:0.65±0.58)比较,差异均无统计学意义(W=192,P=0.11;W=189,P=0.10;W=281,P=0.72;W=241,P=0.62);CINⅠ组样本的ACE值(85±37)和Chao值(66±25)与对照组(ACE:54±25;Chao:48±24)比较,差异有统计学意义(W=99,P=0.006;W=113,P=0.02)。在门水平,对照组中阴道菌群78.69%(309 020/392 722)由厚壁菌门组成,放线菌门占16%(62 846/392 722)。CINⅠ组中厚壁菌门减少至64.86%(208 422/321 318),放线菌门增加至27.71%(89 040/321 318)。CINⅡ/Ⅲ组阴道菌群构成和对照组相似。在属水平,CINⅡ/Ⅲ组和对照组菌群结构相似,以乳酸杆菌为优势菌属[71.81%(307 658/418 424)],同时还包括加德纳菌属[12.91%(55 299/428 424)],其他如普雷沃菌属、奇异菌属等含量较少。在CINⅠ组中,乳酸杆菌属含量下降[56.26%(180 787/321 318)],加德纳菌属相对丰度上升[19.62%(63 057/321 318)],奇异菌属含量上升[7.7%(24 746/321 318)]。本研究发现大部分样本阴道菌群类型(CST)为CSTⅢ、CSTⅠ,分别以惰性乳杆菌、卷曲乳杆菌为优势菌。3组间阴道菌群类型差异无统计学意义(χ2=2.72, P=0.949)。LEfSe分析发现CIN组和对照组中某些细菌类群丰度发生变化。在属水平,地杆菌属、奇异菌属、脲原体属等丰度差异有统计学意义(P<0.05;P<0.05;P<0.01)。在种水平,血清9型解脲脲原体丰度差异有统计学意义(P<0.01)。

结论

不同级别CIN患者阴道菌群多样性及菌群类型与健康妇女相似,但部分细菌类群丰度发生了改变;解脲脲原体等条件致病菌在CIN患者丰度增加。(中华检验医学杂志,2017, 40:505-510)

引用本文: 丁晖, 唐玲丽, 杨佳锦, 等.  宫颈癌前病变患者阴道微生物群落的构成研究 [J]. 中华检验医学杂志,2017,40( 07 ): 505-510. DOI: 10.3760/cma.j.issn.1009-9158.2017.07.007
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宫颈癌是女性第二常见的恶性肿瘤,其发生率占女性生殖道恶性肿瘤的第1位。目前研究已证实,高危型人乳头状瘤病毒(high-risk human papillomavirus, HR-HPV)持续感染是宫颈癌的致病因素。从感染HR-HPV到发展为宫颈癌,这期间存在较长的从宫颈上皮内瘤变Ⅰ(cervical intraepithelial neoplasia,CINⅠ)到宫颈上皮内瘤变Ⅱ/Ⅲ(cervical intraepithelial neoplasia,CINⅡ/Ⅲ)的癌前病变期。宫颈上皮细胞暴露于阴道微环境中,妇女阴道微生物群落对维护阴道微环境稳定具有重要作用,其在宫颈癌前病变进展过程中是否具有作用也一直备受关注。有研究表明,细菌性阴道病与CIN进展相关[1,2,3]。然而,以上研究对阴道微生态的评价多依赖于取阴道分泌物涂片、染色、镜检,并结合阴道pH值、白细胞脂酶等功能性指标,实际工作中受到多种因素干扰而影响结果的准确性。应用传统的细菌培养来鉴定特异性细菌,对评价多样性的阴道微生态群落也不全面。近年来,各种分子生物学技术广泛应用于鉴定微生物群落。然而,传统的分子生物学技术具有耗时长、工作量大且不能完整地反映整个群落的结构信息。新一代高通量测序技术具有成本低、操作简单、重现性好等优点,结合生物信息学分析,能快速、准确地获得全面、结构化的微生物群落信息。本研究拟采用Illumina Miseq测序平台对CIN患者和健康女性阴道微生物群落进行检测、分析和比较,探讨阴道微生物群落构成变化与CIN的关系。

 
 
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宫颈肿瘤
宫颈上皮内瘤样病变
微生物群落
阴道
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