论著
血清中外泌体及外泌体RNA提取方法的比较
中华检验医学杂志, 2016,39(6) : 427-432. DOI: 10.3760/cma.j.issn.1009-9158.2016.06.008
摘要
目的

评价超高速离心法、ExoQuick与TEI试剂盒提取血清中外泌体的价值。

方法

方法学比较。收集2015年8至11月南方医科大学南方医院检验科健康者3名,采集静脉血至采血管,4 ℃静置12 h使其自然凝固后离心取上清液为血清,采用超高速离心法、ExoQuick与TEI试剂盒提取血清中外泌体,通过透射电子显微镜、蛋白印迹技术和NTA颗粒粒度分析仪检测外泌体形态结构、蛋白表达量和浓度与粒径分布,评估外泌体提取效率;采用超高速离心法+Trizol LS法、ExoQuick+SeraMir、TEI+TER与ExoRNeasy试剂盒提取法分离3例血清中外泌体总RNA(exo-RNA),利用Agilent生物分析仪分析RNA片段分布,实时荧光定量PCR仪检测miRNA表达水平。组间蛋白浓度与miRNA表达量的比较采用方差分析。

结果

外泌体提取方法中,比较外泌体浓度和其蛋白浓度,ExoQuick与TEI试剂盒提取浓度高于超高速离心法;超高速离心法提取外泌体同时表达CD9、CD63和TSG101蛋白,而ExoQuick与TEI试剂盒提取外泌体仅表达TSG101。外泌体RNA提取方法中,不同方法影响RNA片段分布和miRNA表达,未影响miRNA相对表达趋势;ExoRNeasy提取RNA条带浓度较高,各miRNA表达水平较高;TEI+TER法未见明显RNA条带,样本中各miRNA表达水平稳定;超高速离心法+Trizol LS法与ExoQuick+SeraMir法提取RNA可见范围较广的低浓度条带,此两法提取RNA中各miRNA表达无明显规律。

结论

外泌体提取方法中传统超高速离心法适用于蛋白组学方面研究,而ExoQuick与TEI试剂盒提取方法适用于血清等稀缺样本外泌体制备。(中华检验医学杂志,2016, 39:427-432)

引用本文: 黄依瑶, 唐月汀, 覃思华, 等.  血清中外泌体及外泌体RNA提取方法的比较 [J]. 中华检验医学杂志,2016,39( 6 ): 427-432. DOI: 10.3760/cma.j.issn.1009-9158.2016.06.008
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外泌体是一类介导体内生物信息分子传递的纳米级小囊泡[1],由Johnstone等[2]于1987年。外泌体能在体内运载和传递生物信息分子,在免疫调节、心血管疾病和肿瘤等生理病理过程中发挥着重要的功能。外泌体可由体内各种活细胞分泌,体液中含量很高,每微升血清中外泌体数量可达3×106[3],其携带的RNA、蛋白质和脂类等生物信息分子会随疾病进展转归发生变化,是颇具临床诊断价值的循环标志物[4]。因此提取纯度高,干扰少的外泌体及其内容物用于后续临床诊断有重要的实用价值。本研究取健康人血清为样本,利用不同外泌体及外泌体RNA(exo-RNA)提取方法组合提取外泌体及其内容物,并对提取所得外泌体和其内蛋白质、RNA进行分析和比较,选取最适于提取外泌体与exo-RNA的实验方法。

 
 
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超速离心法
微RNAs
外泌体